血液RNA提取试剂盒

产品货号：

YTB4891

中文名称：

血液RNA提取试剂盒

英文名称：

RNasy Blood RNA Isolation Kit with Spin Column

产品规格：

12T|50T|200T

发货周期：

1～3天

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本制品是一种基于离心柱法从血液中安全、快速、便捷、稳定、高效、高质量地提取长度大于200个核苷酸(Nucleotide,nt)的RNA的试剂盒，而小于200nt的small RNA被选择性地去除。提取获得的大于200个核苷酸的RNA (也常被称为总RNA)可以用于各种常规用途。

本试剂盒适用于新鲜、冻存、经EDTA、肝素等抗凝处理或经过血液RNA保存液(货号：YTB4014)保存的血液RNA的提取，推荐的血液样品量为200μL。本试剂盒小、中和大包装可分别用于12、50和200个样品的RNA提取。

本试剂盒提取得到的RNA可用于反转录、RT-PCR、qPCR、Northern、点杂交(Dot Blot)、纯化mRNA、体外翻译、RNase protection assay、cDNA克隆等下游实验；也可用于基因表达芯片分析(Microarray)、高通量测序等对RNA质量要求较高的情况。

本试剂盒使用安全。本试剂盒通过特殊的柱纯化介质进行RNA分离纯化，能有效避免传统的TRIzol LS法提取时使用的酚、氯仿等有毒有害有机试剂。
本试剂盒使用快速、便捷。本试剂盒无需使用红细胞裂解液去除无核的红细胞，避免RNA降解；采用柱纯化，无需繁琐的RNA沉淀步骤，提取操作过程仅15～20分钟。相比于传统的TRIzol LS提取法，本试剂盒的操作流程显著简化，缩短了提取时间，降低了RNA被降解的风险。和国外同类柱纯化产品相比，所需操作步骤和操作时间基本一致。
本试剂盒提取得到的RNA得率高、纯度高。纯的RNA其A260/A280约为2.0，但在很多仪器上测定时会高于2.0，低于1.9通常认为有蛋白、DNA或者酚等的污染；纯的RNA其A260/A230约为2.0左右或者略高，低于1.9通常认为有碳水化合物、胍盐、多肽或酚等的污染。本试剂盒效果经反复测试，提取得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2，A260/A230通常为1.9-2.1。

本制品对于小鼠血液样品的提取效果如图1所示。
血液RNA提取试剂盒

图1．本试剂盒对小鼠血液样品的提取效果。小鼠全血新鲜样品(ctrl)和用血液RNA保存液(货号：YTB4014)分别在4℃保存30天、室温保存7天以及37℃保存1天后，使用本制品提取RNA，随后取相同体积的RNA样品进行电泳。电泳条件为：RNA样品变性处理后，在含6.67%甲醛和适量NadRed红色核酸染料(货号：YT015)的1%变性琼脂糖凝胶中进行电泳检测。实测效果可能有所不同，本图仅供参考。

背景资料

RNA按照长度可以分为长链RNA和小RNA，长链RNA通常大于200nt，而小RNA通常小于200nt。长链RNA按照是否编码蛋白或多肽可以分为长链非编码RNA (lncRNA)和mRNA。小RNA主要包括非编码的5.8S rRNA、5S rRNA、tRNA、microRNA (miRNA)、siRNA、piRNA (Piwi-associated small RNA)、tsRNA、srRNA等。

组分	12T	50T	200T
裂解液	8mL	32mL	125mL
结合液	8mL	32mL	125mL
洗涤液I	8mL	32mL	125mL
洗涤液II	15mL	63mL	125mL×2
洗脱液	1.2mL	5mL	15mL
RNA纯化柱及废液收集管	12套	50套	200套
RNA洗脱管	12个	50个	200个

保存：室温，有效期1年。

提取流程

本试剂盒提取RNA的基本流程如图2所示。样品在裂解液中迅速裂解，释放出总RNA，然后让RNA特异性地结合到纯化柱上，而基因组DNA和蛋白质等其它组分通过高速离心被有效去除，再通过3次洗涤充分去除非特异性结合的蛋白、盐等杂质，最后用洗脱液将高纯度的RNA洗脱下来。
血液RNA提取试剂盒提取流程

图2．本试剂盒RNA提取流程示意图。

注意事项

血液样品推荐使用RNAstable血液RNA保存液(货号：YTB4014)进行保存以保持RNA的完整性。
通过本试剂盒提取得到的RNA已经去除绝大多数DNA，通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时，可以在使用说明中步骤4离心后，在纯化柱中加入适量DNase I进行消化，具体请参考使用说明。
本试剂盒提供的所有试剂和耗材都是RNase-free，操作时应小心，避免被污染。所有自行准备的试剂和耗材也都应是RNase-free。如果可能有RNase污染，可考虑用0.01%的DEPC水浸泡过夜，然后高温高压灭菌并烘干。操作时应避免对着样品或所使用的试剂盒耗材呼气或说话，以防RNase污染。建议戴一次性口罩操作。
对于操作环境中RNA酶的去除，推荐使用核酸酶喷雾清除剂(货号：YT400)以去除实验桌面上或其它接触面上的RNase。
本试剂盒所有操作均在室温进行，操作时无需冰浴。所有离心也均在室温进行。
废液收集管在一次提取中需多次使用，切勿中途丢弃。
结合液、洗涤液中含有乙醇，使用后须旋紧瓶盖以防挥发，并须按照易燃试剂的相关规范进行存放和使用。

按照1:3的比例在血液样品中加入裂解液，例如200μL的血液样品中加入600μL的裂解液，轻轻吹打5～10次。
- 保存在RNAstable血液RNA保存液(货号：YTB4014)中的血液样品，请参考RNAstable的使用说明对血液样品进行处理。
加入等体积结合液至裂解液中，轻轻颠倒混匀3～5次。此时可能会有沉淀物产生，属于正常现象。
将混合物(包括沉淀物)转移至纯化柱内，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
- 当裂解液的体积大于300μL时，在加入等体积结合液后，总体积会超过纯化柱的容量，这时应分成2次过柱，即将一半的混合物过柱后，再将剩余的混合物重复步骤3一次。
加入600μL洗涤液I，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
选做：通过本试剂盒提取得到的RNA已经去除绝大多数DNA，通常情况无需DNase处理。后续如进行某些对DNA残留较敏感的实验时，可在本步骤离心后，在纯化柱中加入80μL含10U DNase I的酶溶液(推荐使用百奥莱博RNase-free的DNase I，货号：YT411，每80μL酶溶液按照71.8μL水加8μL 10×Reaction Buffer再加0.2μL 50U/μL DNase I混合配制而成)，室温放置消化15分钟。消化结束后，不需要进行离心等任何额外的操作，直接进入步骤5。
加入600μL洗涤液II，12000×g离心30秒，倒弃收集管内液体。
重复步骤5一次。
最高速(约14000～16000×g)离心2分钟，去除残留的液体。
将RNA纯化柱置于本试剂盒提供的RNA洗脱管中，加入30～50μL洗脱液，室温放置2～3分钟，最高速离心30秒，所得溶液即为纯化的RNA。本试剂盒提取得到的RNA的A260/A280通常为2.0-2.2，A260/A230通常为1.9-2.1。
- 洗脱液需要加到纯化柱柱面中央，使其被完全吸收。如需获得更高浓度的样品，可把洗脱液的体积减小至20μL，但洗脱下来的RNA量会相对减少。室温较低时，洗脱液在37℃预热片刻对得率有所帮助。此外，洗脱后的溶液再次加回到原纯化柱再离心洗脱一次，可提高得率约10～30%；或者在第一次洗脱后使用新的洗脱液再洗脱一次，会获得约为第一次洗脱量15～40%的RNA。

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